Diolch am ymweld â natur.com. Mae gan y fersiwn o'r porwr rydych chi'n ei ddefnyddio gefnogaeth CSS gyfyngedig. I gael y canlyniadau gorau, rydym yn argymell eich bod yn defnyddio fersiwn mwy newydd o'ch porwr (neu'n analluogi modd cydnawsedd yn Internet Explorer). Yn y cyfamser, er mwyn sicrhau cefnogaeth barhaus, rydym yn arddangos y wefan heb steilio na JavaScript.
Mae twf microbaidd mewn clwyfau yn aml yn amlygu ei hun fel bioffilmiau, sy'n ymyrryd ag iachâd ac yn anodd eu dileu. Mae gorchuddion arian newydd yn honni eu bod yn brwydro yn erbyn heintiau clwyfau, ond nid yw eu heffeithlonrwydd gwrth-ffilm ac effeithiau iachâd annibynnol yn annibynnol yn hysbys yn gyffredinol. Gan ddefnyddio modelau biofilm in vitro ac in vivo o Staphylococcus aureus a Pseudomonas aeruginosa, rydym yn adrodd ar effeithiolrwydd gorchuddion sy'n cynhyrchu ïon AG1+; Gwisgoedd AG1+ sy'n cynnwys asid ethylenediaminetetraacetig a chlorid benzethonium (AG1+/EDTA/BC), a gorchuddion sy'n cynnwys nitrad arian (Ag oxysalts). , sy'n cynhyrchu ïonau Ag1+, Ag2+ ac Ag3+ i frwydro yn erbyn biofilm clwyf a'i effaith ar iachâd. Ychydig iawn o effeithiau a gafodd gorchuddion AG1+ ar fioffilm clwyfau in vitro ac mewn llygod (C57BL/6J). Mewn cyferbyniad, gostyngodd halwynau Ag ocsigenedig a gorchuddion AG1+/EDTA/BC yn sylweddol nifer y bacteria hyfyw mewn biofilmiau in vitro a dangosodd ostyngiad sylweddol mewn cydrannau bacteriol ac EPS mewn bioffilmiau clwyf llygoden. Cafodd y gorchuddion hyn effeithiau gwahanol ar iachâd clwyfau sydd wedi'u heintio â bioffilm a heb eu heintio â biofilm, gyda gorchuddion halen ocsigenedig yn cael effeithiau mwy buddiol ar ail-ymgynnull, maint clwyfau, a llid o gymharu â thriniaethau rheoli a gorchuddion arian eraill. Efallai y bydd gwahanol briodweddau ffisiocemegol gorchuddion arian yn cael effeithiau gwahanol ar fioffilm ac iachâd clwyfau, a dylid ystyried hyn wrth ddewis dresin ar gyfer trin clwyfau sydd wedi'u heintio â bioffilm.
Diffinnir clwyfau cronig fel “clwyfau sy'n methu â symud ymlaen trwy gamau arferol iachâd mewn modd trefnus ac amserol” 1. Mae clwyfau cronig yn creu baich seicolegol, cymdeithasol ac economaidd i gleifion a'r system gofal iechyd. Amcangyfrifir bod gwariant blynyddol y GIG ar drin clwyfau a chomorbidities cysylltiedig yn £ 8.3 biliwn yn 2017-182. Ar hyn o bryd mae clwyfau cronig hefyd yn broblem dybryd yn yr Unol Daleithiau, gyda Medicare yn amcangyfrif cost flynyddol trin cleifion â chlwyfau ar $ 28.1– $ 96.8 biliwn3.
Mae haint yn ffactor o bwys sy'n atal iachâd clwyfau. Mae heintiau yn aml yn amlygu fel bioffilmiau, sy'n bresennol mewn 78% o glwyfau cronig nad ydynt yn iachau. Mae bioffilmiau'n ffurfio pan fydd micro-organebau yn dod yn gysylltiedig yn anadferadwy i arwynebau, megis arwynebau clwyfau, ac yn gallu agregu i ffurfio cymunedau sy'n cynhyrchu polymer allgellog (EPS). Mae bioffilm clwyfau yn gysylltiedig ag ymateb llidiol cynyddol gan arwain at ddifrod i feinwe, a all oedi neu atal iachâd4. Gall y cynnydd mewn difrod meinwe fod yn rhannol oherwydd mwy o weithgaredd metalloproteinases matrics, colagenase, elastase a rhywogaethau ocsigen adweithiol55. Ar ben hynny, mae celloedd llidiol a bioffilmiau eu hunain yn ddefnyddwyr uchel o ocsigen ac felly gallant achosi hypocsia meinwe lleol, gan ddisbyddu celloedd yr ocsigen hanfodol sydd eu hangen ar gyfer atgyweirio meinwe yn effeithiol6.
Mae bioffilmiau aeddfed yn gallu gwrthsefyll asiantau gwrthficrobaidd yn fawr, sy'n gofyn am strategaethau ymosodol i reoli heintiau bioffilm, megis triniaeth fecanyddol ac yna triniaeth gwrthficrobaidd effeithiol. Oherwydd y gall bioffilmiau adfywio'n gyflym, gall gwrthficrobau effeithiol leihau'r risg o ail-ffurfio ar ôl dad-friffio llawfeddygol7.
Defnyddir arian fwyfwy mewn gorchuddion gwrthficrobaidd ac yn aml fe'i defnyddir fel triniaeth rheng flaen ar gyfer clwyfau heintiedig cronig. Mae yna lawer o orchuddion arian ar gael yn fasnachol, pob un yn cynnwys cyfansoddiad arian, crynodiad a matrics sylfaen gwahanol. Mae datblygiadau mewn armands arian wedi arwain at ddatblygu armbands arian newydd. Mae'r ffurf fetelaidd o arian (AG0) yn anadweithiol; Er mwyn sicrhau effeithiolrwydd gwrthficrobaidd, rhaid iddo golli electron i ffurfio arian ïonig (AG1+). Mae gorchuddion arian traddodiadol yn cynnwys cyfansoddion arian neu arian metelaidd sydd, pan fyddant yn agored i hylif, yn dadelfennu i ffurfio ïonau AG1+. Mae'r ïonau AG1+ hyn yn adweithio gyda'r gell facteriol, gan dynnu electronau o gydrannau strwythurol neu brosesau critigol sy'n angenrheidiol ar gyfer goroesi. Mae technoleg patent wedi arwain at ddatblygu cyfansoddyn arian newydd, Ag Oxysalts (Silver Nitrate, AG7NO11), sydd wedi'i gynnwys mewn gorchuddion clwyfau. Yn wahanol i arian traddodiadol, mae dadelfennu halwynau sy'n cynnwys ocsigen yn cynhyrchu cyflwr arian â falens uwch (AG1+, Ag2+ac Ag3+). Mae astudiaethau in vitro wedi dangos bod crynodiadau isel o halwynau arian ocsigenedig yn fwy effeithiol nag arian ïon sengl (AG1+) yn erbyn bacteria pathogenig fel Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus ac Escherichia coli8,9. Mae math newydd arall o ddresin arian yn cynnwys cynhwysion ychwanegol, sef asid ethylenediaminetetraacetig (EDTA) a benzethonium clorid (BC), yr adroddir eu bod yn targedu EPS biofilm a thrwy hynny gynyddu treiddiad arian i'r biofilm. Mae'r technolegau arian newydd hyn yn cynnig ffyrdd newydd o dargedu bioffilmiau clwyfau. Fodd bynnag, mae effaith y gwrthficrobau hyn ar amgylchedd y clwyf ac iachâd annibynnol ar heintiau yn bwysig er mwyn sicrhau nad ydynt yn creu amgylchedd clwyf anffafriol nac yn gohirio iachâd. Adroddwyd am bryderon ynghylch cytotoxicity arian in vitro gyda sawl gorchudd arian10,11. Fodd bynnag, nid yw cytotoxicity in vitro wedi cyfieithu i wenwyndra in vivo eto, ac mae sawl gorchudd AG1+ wedi dangos proffil diogelwch da12.
Yma, gwnaethom ymchwilio i effeithiolrwydd gorchuddion carboxymethylcellulose sy'n cynnwys fformwleiddiadau arian newydd yn erbyn biofilm clwyfau in vitro ac in vivo. Yn ogystal, aseswyd effeithiau'r gorchuddion hyn ar ymatebion imiwnedd ac iachâd yn annibynnol ar haint.
Roedd yr holl orchuddion a ddefnyddiwyd ar gael yn fasnachol. Mae Dresin Ffibr Gel 3M Kerracel (3M, Knutsford, UK) yn ddresin ffibr gel 100% di-antimicrobaidd 100% carboxymethylcellulose (CMC) a ddefnyddiwyd fel y dresin reoli yn yr astudiaeth hon. Gwerthuswyd tri gorchudd arian CMC gwrthficrobaidd, sef gwisgo 3M Kerracel AG (3M, Knutsford, y DU), sy'n cynnwys 1.7 wt%. halen arian ocsigenedig (AG7NO11) mewn ïonau arian falens uwch (AG1+, AG2+ac AG3+). Yn ystod dadelfennu ïonau Ag7NO11, Ag1+, Ag2+ ac Ag3+ mae ïonau yn cael eu ffurfio mewn cymhareb o 1: 2: 4. Dresin Aquacel AG Ychwanegol sy'n cynnwys 1.2% clorid arian (AG1+) (Convatec, Deeside, y DU) 13 ac Aquacel AG+dresin ychwanegol sy'n cynnwys 1.2% clorid arian (AG1+), EDTA a Benzethonium clorid (Convatec, Deeside, DEESIDE, UK) 14.
Y straenau a ddefnyddiwyd yn yr astudiaeth hon oedd Pseudomonas aeruginosa NCTC 10781 (Iechyd Cyhoeddus Lloegr, Salisbury) a Staphylococcus aureus NCTC 6571 (Iechyd Cyhoeddus Lloegr, Salisbury).
Tyfwyd bacteria dros nos mewn cawl Muller-Hinton (Oxoid, Altrincham, y DU). The overnight culture was then diluted 1:100 in Mueller-Hinton broth and 200 µl plated onto sterile 0.2 µm Whatman cyclopore membranes (Whatman plc, Maidstone, UK) onto Mueller-Hinton agar plates (Sigma-Aldrich Company Ltd, Kent , Great Britain ). ) Ffurfiant bioffilm trefedigaethol ar 37 ° C am 24 awr. Profwyd y bioffilmiau trefedigaethol hyn am grebachu logarithmig.
Torrwch y dresin yn ddarnau sgwâr 3 cm2 a chyn-drin â dŵr di-flewyn-ar-dafod. Rhowch y rhwymyn dros fioffilm y Wladfa ar y plât agar. Tynnwyd pob 24 ha o fioffilm, a meintiolwyd bacteria hyfyw yn y biofilm (CFU/mL) trwy wanhau cyfresol (10−1 i 10−7) mewn cawl niwtraleiddio ongl dydd (Merck-Millipore). Ar ôl 24 awr o ddeori ar 37 ° C, perfformiwyd cyfrif plât safonol ar blatiau agar Mueller-Hinton. Perfformiwyd pob triniaeth a phwynt amser yn driphlyg, ac ailadroddwyd cyfrif plât ar gyfer pob gwanhau.
Mae croen bol porc ar gael o foch gwyn mawr benywaidd o fewn 15 munud i'w ladd yn unol â safonau allforio Undeb Ewrop. Cafodd y croen ei eillio a'i lanhau â chadachau alcohol, yna ei rewi ar -80 ° C am 24 awr i ddadlau'r croen. Ar ôl dadmer, golchwyd darnau croen 1 cm2 dair gwaith gyda PBS, 0.6% sodiwm hypochlorite, a 70% ethanol am 20 munud bob tro. Cyn tynnu'r epidermis, tynnwch unrhyw ethanol sy'n weddill trwy olchi 3 gwaith mewn PBS di -haint. Tyfwyd y croen mewn plât 6-ffynnon gyda philen neilon 0.45-μm-trwchus (Merck-Millipore) ar ei ben a 3 pad amsugnol (Merck-Millipore) yn cynnwys serwm buchol ffetws 3 ml (Sigma) wedi'i ategu â 10% wedi'i addasu Eryr. Canolig (cyfrwng eryr wedi'i addasu Dulbecco - Aldrich Ltd.).
Tyfwyd bioffilmiau trefedigaethol fel y disgrifiwyd ar gyfer astudiaethau amlygiad bioffilm. Ar ôl diwyllio'r bioffilm ar y bilen am 72 awr, rhoddwyd y biofilm ar wyneb y croen gan ddefnyddio dolen brechu di -haint a thynnwyd y bilen. Yna deorwyd y biofilm ar ddermis y mochyn am 24 awr ychwanegol ar 37 ° C i ganiatáu i'r biofilm aeddfedu a chadw at groen y mochyn. Ar ôl i'r biofilm aeddfedu ac ynghlwm, rhoddwyd dresin 1.5 cm2, wedi'i ragflaenu ymlaen llaw â dŵr distyll di-haint, yn uniongyrchol ar wyneb y croen a'i ddeor ar 37 ° C am 24 awr. Delweddwyd bacteria hyfyw trwy staenio trwy gymhwyso ymweithredydd hyfywedd celloedd prestoblue yn unffurf (Invitrogen, Life Technologies, Paisley, y DU) i arwyneb apical pob explant a'i ddeor am 5 munud. Defnyddiwch gamera digidol Leica DFC425 i ddal delweddau ar unwaith ar ficrosgop Leica MZ8. Meintiolwyd ardaloedd lliwiau wedi'u meintioli gan ddefnyddio fersiwn meddalwedd Image Pro (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD Image-Pro (mediacy.com)). Perfformiwyd sganio microsgopeg electron fel y disgrifir isod.
Gwanhawyd bacteria a dyfwyd dros nos 1: 100 mewn cawl Mueller-Hinton. Ychwanegwyd 200 μl o ddiwylliant at bilen di-haint 0.2 μm Whatman Cyclopore (Whatman, Maidstone, y DU) a'i blatio ar agar Mueller-Hinton. Deorwyd platiau bioffilm ar 37 ° C am 72 awr i ganiatáu ffurfio bioffilm aeddfed.
Ar ôl 3 diwrnod o aeddfedu bioffilm, gosodwyd rhwymyn sgwâr 3 cm2 yn uniongyrchol ar y biofilm a'i ddeor ar 37 ° C am 24 awr. Ar ôl tynnu'r rhwymyn o wyneb y biofilm, ychwanegwyd 1 ml o ymweithredydd hyfywedd celloedd prestoblue (Invitrogen, Waltham, MA) at wyneb pob biofilm am 20 eiliad. Cafodd yr arwynebau eu sychu cyn i newidiadau lliw gael eu recordio gan ddefnyddio camera digidol Nikon D2300 (Nikon UK Ltd., Kingston, y DU).
Paratowch ddiwylliannau dros nos ar agar Mueller-Hinton, trosglwyddwch gytrefi unigol i broth 10 ml Mueller-Hinton a'i ddeor ar ysgydwr ar 37 ° C (100 rpm). Ar ôl deori dros nos, gwanhawyd y diwylliant 1: 100 mewn cawl Mueller-Hinton a gwelwyd 300 µl ar bilen Cylchlythyr Cylchlythyr Whatman Cyclopore 0.2 µm (Whatman International, Maidstone, y DU) ar agar Mueller-Hinton a'i ddeor ar 37 ° C o fewn 72 awr o fewn 72 awr . . Rhoddwyd y bioffilm aeddfed ar y clwyf fel y disgrifir isod.
Gwnaed yr holl waith gydag anifeiliaid ym Mhrifysgol Manceinion o dan drwydded prosiect a gymeradwywyd gan y Swyddfa Lles Anifeiliaid ac Adolygiad Moesegol (t8721BD27) ac yn unol â chanllawiau a gyhoeddwyd gan y Swyddfa Gartref o dan ASPA diwygiedig 2012. Roedd pob awdur yn cadw at y canllawiau cyrraedd. Defnyddiwyd llygod C57BL/6J wyth wythnos oed (Envigo, Oxon, UK) ar gyfer pob astudiaeth in vivo. Cafodd llygod eu anaestheiddio ag isoflurane (Piramal Critical Care Ltd, West Drayton, y DU) ac roedd eu harwynebau dorsal yn cael eu heillio a'u glanhau. Yna rhoddwyd clwyf ysgarthol 2 × 6 mm i bob llygoden gan ddefnyddio dyrnu biopsi stiefel (Schuco International, Swydd Hertford, y DU). Ar gyfer clwyfau sydd wedi'u heintio â bioffilm, rhowch fioffilm trefedigaethol 72 awr a dyfir ar y bilen fel y disgrifir uchod i haen dermol y clwyf gan ddefnyddio dolen brechu di-haint yn syth ar ôl anaf a thaflu'r bilen. Mae un centimetr sgwâr o wisgo yn cael ei ragflaenu â dŵr di-haint i gynnal amgylchedd clwyf llaith. Rhoddwyd gorchuddion yn uniongyrchol ar bob clwyf a'u gorchuddio â ffilm 3M Tegaderm (3M, Bracknell, y DU) a glud hylif mastisol (Eloquest Healthcare, Ferndale, MI) a gymhwyswyd o amgylch yr ymylon i ddarparu adlyniad ychwanegol. Gweinyddwyd Buprenorffin (Animalcare, Efrog, y DU) ar grynodiad o 0.1 mg/kg fel analgesig. Llygod difa dridiau ar ôl anaf gan ddefnyddio dull Atodlen 1 a thynnu, haneru, a storio ardal y clwyf yn ôl yr angen.
Perfformiwyd staenio hematoxylin (Thermofisher Scientific) ac Eosin (gwyddonol Thermofisher Scientific) yn unol â phrotocol y gwneuthurwr. Meintiolwyd ardal clwyfau ac reepithelialization gan ddefnyddio Fersiwn 10 Software Image Pro (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD).
Cafodd adrannau meinwe eu dadwenwyno yn xylene (Thermofisher Scientific, Loughborough, y DU), eu hailhydradu ag ethanol wedi'i raddio 100-50%, a'u trochi'n fyr mewn dŵr wedi'i ddad -ddyneiddio (Thermofisher Scientific). Perfformiwyd immunohistochemistry gan ddefnyddio pecyn Vectastain Elite ABC PK-6104 (Vector Laboratories, Burlingame, CA) yn unol â phrotocol y gwneuthurwr. Cafodd gwrthgyrff cynradd i niwtroffiliau nimp-r14 (gwyddonol thermofisher) a macroffagau ms cd107b pur m3/84 (biowyddorau bd, wokingham, y DU) eu gwanhau 1: 100 mewn toddiant blocio a'u hychwanegu at yr arwyneb torri, ac yna 2 wrthgyrff gwrthgyrff gwrth-fectastain, fectastein Pecyn swbstrad ABC a Vector Nova Red Peroxidase (HRP) (Vector Laboratories, Burlingame, CA) a'u gwrth -ddal â hematoxylin. Cafwyd delweddau gan ddefnyddio microsgop Olympus BX43 a chamera digidol Olympus DP73 (Olympus, Southend-on-Sea, y DU).
Roedd samplau croen yn sefydlog mewn glutaraldehyde 2.5% a fformaldehyd 4% mewn 0.1 M HEPES (pH 7.4) am 24 awr ar 4 ° C. Cafodd samplau eu dadhydradu gan ddefnyddio ethanol graddedig a'u sychu yn CO2 gan ddefnyddio sychwr pwynt critigol cworwm K850 (Quorum Technologies Ltd, Loughton, y DU) a sputter wedi'i orchuddio ag aloi aur-paladiwm gan ddefnyddio system sputter/disgleirio tywynnu cworwm SC7620 mini. Delweddwyd sbesimenau gan ddefnyddio microsgop electron sganio FEI Quanta 250 (Thermofisher Scientific) i ddelweddu pwynt canolog y clwyf.
Rhoddwyd ïodid TOTO-1 (2 μM) ar wyneb clwyf y llygoden esgusodol a'i ddeor am 5 munud ar 37 ° C (Thermofisher Scientific) a'i drin â Syto-60 (10 μm) ar 37 ° C (Thermofisher Scientific). Crëwyd delweddau pentwr Z 15 munud gan ddefnyddio Leica TCS SP8.
Cafodd data dyblyg biolegol a thechnegol eu tablu a'u dadansoddi gan ddefnyddio meddalwedd GraphPad Prism V9 (meddalwedd GraphPad, La Jolla, CA). Defnyddiwyd dadansoddiad unffordd o amrywiant gyda chymariaethau lluosog gan ddefnyddio prawf post hoc Dunnett i brofi am wahaniaethau rhwng pob triniaeth a'r dresin rheoli nad yw'n antimicrobaidd. Ystyriwyd bod gwerth p <0.05 yn arwyddocaol.
Aseswyd effeithiolrwydd gorchuddion ffibrog gel arian yn gyntaf yn erbyn cytrefi biofilm Staphylococcus aureus a Pseudomonas aeruginosa in vitro. Mae gorchuddion arian yn cynnwys gwahanol fformiwlâu o arian: mae gorchuddion arian traddodiadol yn cynhyrchu ïonau AG1+; Gall gorchuddion arian, a all gynhyrchu ïonau AG1+ ar ôl ychwanegu EDTA/BC, ddinistrio'r matrics biofilm a datgelu bacteria i arian o dan effaith gwrthfacterol arian. ïonau15 a gorchuddion sy'n cynnwys halwynau Ag ocsigenedig sy'n cynhyrchu ïonau Ag1+, Ag2+ ac Ag3+. Cymharwyd ei effeithiolrwydd â dresin rheolaeth nad yw'n antimicrobaidd wedi'i wneud o ffibrau gel. Aseswyd bacteria hyfyw sy'n weddill yn y biofilm bob 24 awr am 8 diwrnod (Ffigur 1). Ar ddiwrnod 5, ail -luniwyd y bioffilm â 3.85 × 105s. Staphylococcus aureus neu 1.22 × 105c. Aeruginosa i asesu adferiad bioffilm. O'u cymharu â gorchuddion rheoli nad ydynt yn antimicrobaidd, cyn lleied o effaith â phosibl ar hyfywedd bacteriol yn Staphylococcus aureus a Pseudomonas aeruginosa biofilmiau dros 5 diwrnod. Mewn cyferbyniad, roedd gorchuddion sy'n cynnwys halwynau Ag ac Ag1 + + EDTA/BC ocsigenedig yn effeithiol wrth ladd bacteria o fewn y biofilm o fewn 5 diwrnod. Ar ôl brechu dro ar ôl tro gyda bacteria planctonig ar ddiwrnod 5, ni welwyd adfer y biofilm (Ffig. 1).
Meintioli bacteria hyfyw yn Staphylococcus aureus a Pseudomonas biofilmiau aeruginosa ar ôl triniaeth gyda gorchuddion arian. Cafodd cytrefi biofilm Staphylococcus aureus a Pseudomonas aeruginosa eu trin â gorchuddion arian neu orchuddion rheoli nad ydynt yn antimicrobaidd, a phennwyd nifer y bacteria hyfyw sy'n weddill bob 24 awr. Ar ôl 5 diwrnod, ail -luniwyd y bioffilm â 3.85 × 105s. Staphylococcus aureus neu 1.22 × 105c. Ffurfiwyd cytrefi o'r bacterioplancton pseudomonas aeruginosa yn unigol i asesu adferiad bioffilm. Mae graffiau'n dangos cymedr +/- Gwall safonol.
Er mwyn delweddu effaith gorchuddion arian ar hyfywedd bioffilm, cymhwyswyd gorchuddion i fioffilmiau aeddfed a dyfwyd ar groen mochyn ex vivo. Ar ôl 24 awr, mae'r dresin yn cael ei dynnu ac mae'r biofilm wedi'i staenio â llifyn adweithiol glas, sy'n cael ei fetaboli gan facteria byw i liw pinc. Roedd bioffilmiau a gafodd eu trin â gorchuddion rheoli yn binc, gan nodi presenoldeb bacteria hyfyw yn y biofilm (Ffigur 2A). Mewn cyferbyniad, roedd y bioffilm a gafodd ei drin â'r dresin Ag oxysols yn las yn bennaf, gan nodi bod y bacteria sy'n weddill ar wyneb croen y mochyn yn facteria na ellir eu defnyddio (Ffigur 2b). Gwelwyd lliw glas a phinc cymysg mewn bioffilmiau a gafodd eu trin â gorchuddion sy'n cynnwys Ag1+, gan nodi presenoldeb bacteria hyfyw ac an-hyfyw yn y biofilm (Ffigur 2C), ond roedd gorchuddion EDTA/BC sy'n cynnwys AG1+ yn las yn bennaf gyda rhai smotiau pinc. gan nodi ardaloedd nad yw'r dresin arian yn effeithio arnynt (Ffigur 2D). Dangosodd meintioli ardaloedd gweithredol (pinc) ac anactif (glas) fod y darn rheoli yn 75% yn weithredol (Ffigur 2E). Perfformiodd gorchuddion AG1 + + EDTA/BC yn yr un modd â gorchuddion halen AG ocsigenedig, gyda chyfraddau goroesi o 13% a 14%, yn y drefn honno. Fe wnaeth y dresin AG1+ hefyd leihau hyfywedd bacteriol 21%. Yna gwelwyd y bioffilmiau hyn gan ddefnyddio sganio microsgopeg electron (SEM). Ar ôl triniaeth gyda'r dresin reoli a'r dresin AG1+, gwelwyd haen o Pseudomonas aeruginosa yn gorchuddio'r croen mochyn (Ffigur 2F, H), ond ar ôl triniaeth gyda'r dresin AG1+, ychydig o gelloedd bacteriol a ddarganfuwyd ac ychydig o gelloedd bacteriol a ddarganfuwyd o dan. Gellir ystyried ffibrau colagen fel strwythur meinwe croen mochyn (Ffigur 2G). Ar ôl triniaeth gyda dresin AG1 + + EDTA/BC, roedd placiau bacteriol a phlaciau ffibr colagen sylfaenol i'w gweld (Ffigur 2i).
Delweddu bioffilm Pseudomonas aeruginosa ar ôl triniaeth gwisgo arian. Delweddwyd hyfywedd bacteriol (A-D) mewn bioffilmiau Pseudomonas aeruginosa a dyfwyd ar groen mochyn gan ddefnyddio llifyn hyfywedd prestoblue 24 awr ar ôl triniaeth gyda gorchuddion arian neu orchuddion rheoli nad ydynt yn antimicrobaidd. Mae bacteria byw yn binc, bacteria nad ydynt yn hyfyw ac mae croen moch yn las. (E) Meintioli bioffilmiau Pseudomonas aeruginosa a dyfir ar groen mochyn (smotyn pinc) gan ddefnyddio sganio microsgopeg electron delwedd pro fersiwn 10 (FI) a'i drin â dresin arian neu ddresin rheoli nad yw'n antimicrobaidd am 24 awr. Bar Graddfa SEM = 5 µm. (J - M) Tyfodd bioffilmiau trefedigaethol ar hidlwyr a chawsant eu staenio â llifyn adweithiol prestoblue ar ôl 24 h o ddeori gyda gorchuddion arian.
Er mwyn penderfynu a oedd cyswllt agos rhwng y gorchuddion a'r bioffilmiau yn effeithio ar effeithiolrwydd y gorchuddion, cafodd bioffilmiau trefedigaethol a osodwyd ar wyneb gwastad eu trin â'r gorchuddion am 24 awr ac yna eu staenio â llifynnau adweithiol. Roedd y biofilm heb ei drin yn binc tywyll mewn lliw (Ffigur 2J). Mewn cyferbyniad â bioffilmiau a gafodd eu trin â gorchuddion sy'n cynnwys halwynau Ag ocsigenedig (Ffigur 2K), dangosodd bioffilmiau a gafodd eu trin â gorchuddion sy'n cynnwys AG1+ neu AG1++ EDTA/BC fandiau o staenio pinc (Ffigur 2L, M). Mae'r lliw pinc hwn yn dynodi presenoldeb bacteria hyfyw ac mae'n gysylltiedig â'r ardal suture yn y dresin. Mae'r ardaloedd hyn wedi'u gwnïo yn creu lleoedd marw sy'n caniatáu i facteria yn y biofilm oroesi.
Er mwyn gwerthuso effeithiolrwydd gorchuddion arian yn vivo, roedd clwyfau wedi'u hesgusodi o lygod wedi'u heintio â bioffilmiau aeddfed S. aureus a P. aeruginosa yn cael eu trin â gorchuddion rheoli nonantimicrobaidd neu orchuddion arian. Ar ôl 3 diwrnod o driniaeth, dangosodd dadansoddiad delwedd macrosgopig feintiau clwyfau llai wrth gael eu trin â gorchuddion halen ocsigenedig o gymharu â gorchuddion rheoli antimicrobaidd a gorchuddion arian eraill (Ffigur 3A-H). I gadarnhau'r arsylwadau hyn, cynaeafwyd clwyfau a meintiolwyd arwynebedd clwyfau a meintiolwyd ail-beiriannu ar adrannau meinwe hematoxylin a staen Eosin gan ddefnyddio fersiwn meddalwedd Image Pro Fersiwn 10 (Ffigur 3I-L).
Effaith gorchuddion arian ar wyneb y clwyf ac ail-epithelialization clwyfau sydd wedi'u heintio â bioffilmiau. (A -H) Celloedd bach sydd wedi'u heintio â bioffilmiau o Pseudomonas aeruginosa (A -D) a Staphylococcus aureus (E -H) ar ôl tridiau o driniaeth gyda dresin rheolaeth nonantimicrobaidd, dresi halen Ag ocsigenedig, dresin Ag1+, ac Ag1+ gwisgo. Delweddau macrosgopig cynrychioliadol. Clwyfau llygod gyda dresin AG1 + + EDTA/BC. (IL) Haint Pseudomonas aeruginosa cynrychioliadol, adrannau histolegol wedi'u staenio â hematoxylin ac eosin, a ddefnyddir i feintioli arwynebedd clwyfau ac adfywio epithelial. Meintioli arwynebedd clwyfau (M, O) ac ail -ymgynnull canrannol (N, P) o glwyfau sydd wedi'u heintio â Pseudomonas aeruginosa (M, N) a Staphylococcus aureus (O, P) bioffilmiau (fesul grŵp triniaeth n = 12). Mae graffiau'n dangos cymedr +/- Gwall safonol. Mae * yn golygu p = <0.05 ** yn golygu p = <0.01; Graddfa macrosgopig = 2.5 mm, graddfa histolegol = 500 µm.
Dangosodd meintioli arwynebedd clwyfau mewn clwyfau sydd wedi'u heintio â bioffilm pseudomonas aeruginosa (Ffigur 3m) fod gan glwyfau a gafodd eu trin ag ocsalts Ag faint clwyf cyfartalog o 2.5 mm2, tra bod gan y dresin rheoli antimicrobaidd maint clwyf cyfartalog o 3.1 mm2 ar gyfartaledd, nad gwir. wedi cyrraedd arwyddocâd ystadegol (Ffigur 3M). p = 0.423). Ni ddangosodd clwyfau a gafodd eu trin ag AG1+ neu AG1++ EDTA/BC ostyngiad yn arwynebedd y clwyf (3.1 mm2 a 3.6 mm2, yn y drefn honno). Hyrwyddodd triniaeth gyda dresin halen Ag ocsigenedig ail-epithelialization i raddau mwy na'r dresin rheolaeth antimicrobaidd (34% a 15%, yn y drefn honno; P = 0.029) ac Ag1+ neu Ag1++ EDTA/BC (10% ac 11%) (10%) ( Ffigur 3n). . , yn y drefn honno).
Gwelwyd tueddiadau tebyg yn ardal y clwyf ac adfywio epithelial mewn clwyfau sydd wedi'u heintio â bioffilmiau S. aureus (Ffigur 3O). Gostyngodd gorchuddion sy'n cynnwys halwynau arian ocsigenedig arwynebedd clwyfau (2.0 mm2) 23% o'i gymharu â'r rheolaeth dresin antimicrobaidd (2.6 mm2), er nad oedd y gostyngiad hwn yn arwyddocaol (p = 0.304) (Ffig. 3O). Yn ogystal, gostyngwyd ardal y clwyf yn y grŵp triniaeth AG1+ ychydig (2.4 mm2), tra na wnaeth y clwyf a gafodd ei drin â dresin AG1++ EDTA/BC leihau arwynebedd y clwyf (2.9 mm2). Roedd halwynau ocsigen AG hefyd yn hyrwyddo ail-epithelialization clwyfau sydd wedi'u heintio â biofilm S. aureus (31%) i raddau mwy na'r rhai a gafodd eu trin â gorchuddion rheoli antimicrobaidd (12%, p = 0.003) (Ffigur 3c). Dangosodd dresin AG1+ (16%, p = 0.903) ac AG+ 1+ EDTA/BC (14%, p = 0.965) lefelau o adfywiad epithelial tebyg i reolaeth.
I ddelweddu effaith gorchuddion arian ar y matrics biofilm, perfformiwyd staenio ïodid Toto 1 a Syto 60 (Ffig. 4). Mae ïodid TOTO 1 yn llifyn na ellir ei drin â chell y gellir ei ddefnyddio i ddelweddu asidau niwclëig allgellog yn gywir, sy'n doreithiog yn EPS biofilmiau. Mae Syto 60 yn llifyn athraidd celloedd a ddefnyddir fel gwrth -fain16. Dangosodd arsylwadau o Toto 1 a Syto 60 ïodid mewn clwyfau wedi'u brechu â bioffilmiau o Pseudomonas aeruginosa (Ffigur 4A-D) a Staphylococcus aureus (Ffigur 4i-L) fod EPS yn y biofilm wedi lleihau'n sylweddol. yn cynnwys halwynau ocsigenedig AG ac AG1 + + EDTA/BC. Fe wnaeth gorchuddion AG1+ heb gydrannau gwrth-ffilm ychwanegol leihau DNA heb gell yn sylweddol mewn clwyfau wedi'u brechu â pseudomonas aeruginosa ond roeddent yn llai effeithiol mewn clwyfau wedi'u brechu â staphylococcus aureus.
Delweddu in vivo o fioffilm clwyf ar ôl 3 diwrnod o driniaeth gyda rheolaeth neu orchuddion arian. Delweddau confocal o Pseudomonas aeruginosa (A -D) a Staphylococcus aureus (I - L) wedi'u staenio â Toto 1 (gwyrdd) i ddelweddu asidau niwclëig allgellog, cydran o bolymerau biofilm allgellog. I staenio asidau niwclëig mewngellol, defnyddiwch Syto 60 (coch). asidau. P. Sganio microsgopeg electron o glwyfau sydd wedi'u heintio â bioffilmiau Pseudomonas aeruginosa (E -H) a Staphylococcus aureus (M - P) ar ôl 3 diwrnod o driniaeth gyda rheolaeth ac gorchuddion arian. Bar Graddfa SEM = 5 µm. Bar graddfa delweddu confocal = 50 µm.
Dangosodd sganio microsgopeg electron fod llygod wedi'u brechu â threfedigaethau bioffilm o Pseudomonas aeruginosa (Ffigur 4E-H) a Staphylococcus aureus (Ffigur 4M-P) wedi cael cryn dipyn yn llai o facteria yn eu clwyfau ar ôl 3 diwrnod o driniaeth gyda'r holl orchuddion arian.
Er mwyn gwerthuso effaith gorchuddion arian ar lid clwyfau mewn llygod sydd wedi'u heintio â bioffilm, cafodd rhannau o glwyfau wedi'u heintio â bioffilm a gafodd eu trin â rheolaeth neu orchuddion arian am 3 diwrnod eu staenio'n imiwnocemegol gan ddefnyddio gwrthgyrff sy'n benodol ar gyfer niwtroffiliau a macroffagau. Penderfyniad meintiol o niwtroffiliau a macroffagau yn fewnol. meinwe gronynniad. Ffigur 5). Fe wnaeth pob gorchudd arian leihau nifer y niwtroffiliau a macroffagau mewn clwyfau sydd wedi'u heintio â Pseudomonas aeruginosa o gymharu â gorchuddion rheoli antimicrobaidd ar ôl tridiau o driniaeth. Fodd bynnag, arweiniodd triniaeth gyda'r dresin halen arian ocsigenedig at ostyngiad mwy mewn niwtroffiliau (p = <0.0001) a macroffagau (p = <0.0001) o'i gymharu â gorchuddion arian eraill a brofwyd (Ffigur 5i, J). Er bod Ag1++ EDTA/BC wedi cael mwy o effaith ar fioffilm clwyfau, gostyngodd lefelau niwtroffil a macrophage i raddau llai na'r dresin AG1+. Gwelwyd clwyfau cymedrol wedi'u heintio â biofilm S. aureus hefyd ar ôl gwisgo gydag ocsisau AG (P = <0.0001), AG1+ (P = 0.0008) ac AG1 ++ EDTA/BC (P = 0.0043) o gymharu â rheolaeth. Gwelir tueddiadau tebyg ar gyfer niwtropenia. rhwymyn (Ffig. 5k). Fodd bynnag, dim ond y dresin halen AG ocsigenedig a ddangosodd ostyngiad sylweddol yn nifer y macroffagau mewn meinwe gronynniad o'i gymharu â rheolaeth mewn clwyfau sydd wedi'u heintio â bioffilmiau S. aureus (p = 0.0339) (Ffigur 5L).
Cafodd niwtroffiliau a macroffagau eu meintioli mewn clwyfau sydd wedi'u heintio â pseudomonas aeruginosa a biofilmiau Staphylococcus aureus ar ôl 3 diwrnod o driniaeth gyda rheolaeth antimicrobial neu orchuddion arian. Meintiolwyd niwtroffiliau (AD) a macroffagau (EH) mewn adrannau meinwe wedi'u staenio â gwrthgyrff sy'n benodol ar gyfer niwtroffiliau neu macroffagau. Meintioli niwtroffiliau (I a K) a macroffagau (J ac L) mewn clwyfau sydd wedi'u heintio â pseudomonas aeruginosa (I a J) a bioffilmiau Staphylococcus aureus (K&L). N = 12 y grŵp. Mae graffiau'n dangos cymedr +/- Gwall safonol, gwerthoedd arwyddocâd o'u cymharu â dresin rheolaeth an-antibacterial, * yn golygu p = <0.05, ** yn golygu p = <0.01; Mae *** yn golygu p = <0.001; yn nodi p = <0.0001).
Yna gwnaethom asesu effaith gorchuddion arian ar iachâd haint-annibynnol. Cafodd clwyfau ysgarthol heb eu heintio eu trin â dresin rheolaeth antimicrobaidd neu ddresin arian am 3 diwrnod (Ffigur 6). Ymhlith y gorchuddion arian a brofwyd, dim ond clwyfau a gafodd eu trin â'r dresin halen ocsigenedig oedd yn ymddangos yn llai ar ddelweddau macrosgopig na chlwyfau a gafodd eu trin â'r rheolaeth (Ffigur 6A-D). Dangosodd meintioli arwynebedd clwyfau gan ddefnyddio dadansoddiad histolegol mai arwynebedd y clwyf ar gyfartaledd ar ôl triniaeth gyda'r dresin Ag oxysol oedd 2.35 mm2 o'i gymharu â 2.96 mm2 ar gyfer clwyfau a gafodd eu trin â'r grŵp rheoli, ond ni chyrhaeddodd y gwahaniaeth hwn arwyddocâd ystadegol (p = 0.488) (Ffig . Mewn cyferbyniad, ni welwyd unrhyw ostyngiad yn arwynebedd y clwyf ar ôl triniaeth ag gorchuddion AG1+ (3.38 mm2, p = 0.757) neu AG1++ EDTA/BC (4.18 mm2, p = 0.054) o gymharu â'r grŵp rheoli. Gwelwyd mwy o adfywio epithelial gyda'r dresin Ag oxysol o'i gymharu â'r grŵp rheoli (30% o'i gymharu â 22%, yn y drefn honno), er na chyrhaeddodd hyn arwyddocâd (p = 0.067), mae hyn yn eithaf arwyddocaol ac yn cadarnhau canlyniadau blaenorol. Mae dresin gydag oxysols yn hyrwyddo ail-epithelialization. -Epithelization clwyfau heb eu heintio17. Mewn cyferbyniad, ni chafodd triniaeth ag AG1+ neu Ag1++ EDTA/BC unrhyw effaith na dangosodd lai o ail-epithelialization o'i gymharu â rheolaeth.
Effaith gwisgo clwyfau arian ar iachâd clwyfau mewn llygod heb eu heintio gyda echdoriad llwyr. (AD) Delweddau macrosgopig cynrychioliadol o glwyfau ar ôl tridiau o driniaeth gyda dresin rheolaeth nad yw'n antimicrobaidd a dresin arian. (Eh) Adrannau clwyfau cynrychioliadol wedi'u staenio â hematoxylin ac eosin. Cyfrifwyd meintioli arwynebedd clwyfau (I) a chanran yr ail -ymgynnull (J) o adrannau histolegol ar ganol y clwyf gan ddefnyddio meddalwedd dadansoddi delwedd (n = 11-12 y grŵp triniaeth). Mae graffiau'n dangos cymedr +/- Gwall safonol. * yn golygu p = <0.05.
Mae gan arian hanes hir o ddefnydd fel therapi gwrthficrobaidd mewn iachâd clwyfau, ond gall y nifer o wahanol fformwleiddiadau a dulliau dosbarthu arwain at wahaniaethau yn effeithiolrwydd gwrthficrobaidd 18. Ar ben hynny, nid yw priodweddau gwrthfiofilm systemau dosbarthu arian penodol yn cael eu deall yn llawn. Er bod yr ymateb imiwnedd gwesteiwr yn gymharol effeithiol yn erbyn bacteria planctonig, mae'n gyffredinol yn llai effeithiol yn erbyn biofilms19. Mae bacteria planctonig yn rhwydd yn ffagocytos gan macroffagau, ond o fewn bioffilmiau, mae celloedd agregedig yn peri problemau ychwanegol trwy gyfyngu'r ymateb gwesteiwr i'r graddau y gall celloedd imiwnedd gael apoptosis a rhyddhau ffactorau proinflammatory i wella'r ymateb imiwn20. Gwelwyd y gall rhai leukocytes dreiddio biofilms21 ond nad ydynt yn methu â bacteria phagocytose unwaith y bydd yr amddiffyniad hwn yn cael ei gyfaddawdu22. Dylid defnyddio dull cyfannol i gefnogi'r ymateb imiwnedd gwesteiwr yn erbyn haint bioffilm clwyfau. Gall dad -friffio clwyfau amharu'n gorfforol ar y biofilm a chael gwared ar y rhan fwyaf o'r bioburden, ond gall yr ymateb imiwnedd gwesteiwr fod yn aneffeithiol yn erbyn biofilm sy'n weddill, yn enwedig os yw'r ymateb imiwnedd gwesteiwr yn cael ei gyfaddawdu. Felly, gall therapïau gwrthficrobaidd fel gorchuddion arian gefnogi'r ymateb imiwnedd gwesteiwr a dileu heintiau bioffilm. Gall cyfansoddiad, canolbwyntio, hydoddedd a swbstrad cyflenwi ddylanwadu ar effeithiolrwydd gwrthficrobaidd arian. Yn ystod y blynyddoedd diwethaf, mae datblygiadau mewn technoleg prosesu arian wedi gwneud y gorchuddion hyn yn fwy effeithiol9,23. Wrth i dechnoleg gwisgo arian ddatblygu, mae'n bwysig deall effeithiolrwydd y gorchuddion hyn wrth reoli haint clwyfau ac, yn bwysicach fyth, effaith y ffurfiau grymus hyn o arian ar amgylchedd ac iachâd y clwyf.
Yn yr astudiaeth hon, gwnaethom gymharu effeithiolrwydd dau orchudd arian datblygedig â gorchuddion arian confensiynol sy'n cynhyrchu ïonau AG1+ yn erbyn bioffilmiau gan ddefnyddio gwahanol fodelau in vitro ac in vivo. Gwnaethom hefyd asesu effaith y gorchuddion hyn ar amgylchedd y clwyf ac iachâd haint-annibynnol. Er mwyn lleihau dylanwad y matrics dosbarthu, roedd yr holl orchuddion arian a brofwyd yn cynnwys carboxymethylcellulose.
Mae ein gwerthusiad rhagarweiniol o'r gorchuddion arian hyn yn erbyn biofilmiau trefedigaethol Pseudomonas aeruginosa a Staphylococcus aureus yn dangos, yn wahanol i orchuddion AG1+ traddodiadol, dau orchudd arian datblygedig, AG1++ EDTA/CC ac mae Ag Ocsigenedig Ag yn effeithiol yn 5. Biotteria yn effeithiol yn biotteria yn agos. ychydig ddyddiau. Yn ogystal, mae'r gorchuddion hyn yn atal ail-ffurfio bioffilm wrth ddod i gysylltiad dro ar ôl tro i facteria planctonig. Roedd y dresin AG1+ yn cynnwys clorid arian, yr un cyfansoddyn arian a matrics sylfaen ag AG1++ EDTA/BC, a chafodd effaith gyfyngedig ar hyfywedd bacteriol yn y biofilm dros yr un cyfnod. Mae'r arsylwi bod dresin AG1++ EDTA/BC yn fwy effeithiol yn erbyn biofilm na dresin AG1+ sy'n cynnwys yr un matrics a chyfansoddyn arian yn cefnogi'r syniad bod angen cynhwysion ychwanegol i gynyddu effeithiolrwydd clorid arian yn erbyn biofilm, ag yr adroddwyd iddo adroddwyd mewn man arall15. Mae'r canlyniadau hyn yn cefnogi'r syniad bod BC ac EDTA yn chwarae rôl ychwanegol sy'n cyfrannu at effeithiolrwydd gwisgo cyffredinol ac y gallai absenoldeb y gydran hon mewn gorchuddion AG1+ fod wedi cyfrannu at y methiant i ddangos effeithiolrwydd in vitro. Canfuom fod gorchuddion halen AG ocsigenedig sy'n cynhyrchu ïonau Ag2+ ac Ag3+ yn arddangos effeithiolrwydd gwrthfacterol cryfach nag AG1+ ac ar lefelau tebyg i AG1++ EDTA/BC. Fodd bynnag, oherwydd y potensial rhydocs uchel, nid yw'n eglur pa mor hir y mae ïonau AG3+ yn parhau i fod yn weithredol ac yn effeithiol yn erbyn bioffilmiau clwyfau ac felly mae'n haeddu astudiaeth bellach. Yn ogystal, mae yna lawer o wahanol orchuddion sy'n cynhyrchu ïonau AG1+ na chawsant eu profi yn yr astudiaeth hon. Mae'r gorchuddion hyn yn cynnwys gwahanol gyfansoddion arian, crynodiadau a matricsau sylfaen, a allai ddylanwadu ar ddanfon ïonau Ag1+ a'u heffeithiolrwydd yn erbyn bioffilmiau. Mae'n werth nodi hefyd bod yna lawer o wahanol fodelau in vitro ac in vivo a ddefnyddir i werthuso effeithiolrwydd gorchuddion clwyfau yn erbyn biofilmiau. Bydd y math o fodel a ddefnyddir, yn ogystal â chynnwys halen a phrotein y cyfryngau a ddefnyddir yn y modelau hyn, yn dylanwadu ar effeithiolrwydd y dresin. Yn ein model in vivo, gwnaethom ganiatáu i'r bioffilm aeddfedu in vitro ac yna ei drosglwyddo i arwyneb dermol y clwyf. Mae ymateb imiwnedd y llygoden westeiwr yn gymharol effeithiol yn erbyn bacteria planctonig a roddir ar y clwyf, a thrwy hynny ffurfio biofilm wrth i'r clwyf wella. Mae ychwanegu biofilm aeddfed i glwyf yn cyfyngu effeithiolrwydd yr ymateb imiwnedd gwesteiwr i ffurfio bioffilm trwy ganiatáu i'r biofilm aeddfed sefydlu ei hun o fewn y clwyf cyn y gall iachâd ddechrau. Felly, mae ein model yn caniatáu inni werthuso effeithiolrwydd gorchuddion gwrthficrobaidd ar fioffilmiau aeddfed cyn i glwyfau ddechrau gwella.
Gwelsom hefyd fod ffitrwydd gwisgo yn dylanwadu ar effeithiolrwydd gorchuddion arian ar fioffilmiau in vitro-tyfu a chroen mochyn. Mae cysylltiad agos â'r clwyf yn cael ei ystyried yn hanfodol ar gyfer effeithiolrwydd gwrthficrobaidd y dresin24,25. Roedd gorchuddion a oedd yn cynnwys halwynau Ag ocsigenedig mewn cysylltiad agos â bioffilmiau aeddfed, gan arwain at ostyngiad sylweddol yn nifer y bacteria hyfyw yn y biofilm ar ôl 24 awr. Mewn cyferbyniad, wrth gael eu trin â gorchuddion AG1+ ac AG1++ EDTA/BC, arhosodd niferoedd sylweddol o facteria hyfyw. Mae'r gorchuddion hyn yn cynnwys cymalau ar hyd y dresin, sy'n creu lleoedd marw sy'n atal cysylltiad agos â'r biofilm. Yn ein hastudiaethau in vitro, roedd yr ardaloedd digyswllt hyn yn atal lladd bacteria hyfyw yn y biofilm. Gwnaethom asesu hyfywedd bacteriol dim ond ar ôl 24 awr o driniaeth; Dros amser, wrth i'r dresin fynd yn fwy dirlawn, efallai y bydd llai o le marw, gan leihau'r ardal ar gyfer y bacteria hyfyw hyn. Fodd bynnag, mae hyn yn tynnu sylw at bwysigrwydd cyfansoddiad y dresin, nid dim ond y math o arian yn y dresin.
Er bod astudiaethau in vitro yn ddefnyddiol ar gyfer cymharu effeithiolrwydd gwahanol dechnolegau arian, mae hefyd yn bwysig deall effeithiau'r gorchuddion hyn ar fioffilmiau yn vivo, lle mae meinwe gwesteiwr ac ymatebion imiwnedd yn cyfrannu at effeithiolrwydd y gorchuddion yn erbyn bioffilmiau. Gwelwyd effaith y gorchuddion hyn ar fioffilmiau clwyfau gan ddefnyddio sganio microsgopeg electron a staenio EPS y biofilm gan ddefnyddio llifynnau DNA mewngellol ac allgellog. Gwelsom, ar ôl 3 diwrnod o driniaeth, fod yr holl orchuddion yn effeithiol wrth leihau DNA heb gelloedd mewn clwyfau wedi'u heintio â bioffilm, ond roedd y dresin AG1+ yn llai effeithiol mewn clwyfau a heintiwyd gan Staphylococcus aureus. Dangosodd sganio microsgopeg electron hefyd fod cryn dipyn yn llai o facteria yn bresennol mewn clwyfau a gafodd eu trin â'r gorchuddion arian, er bod hyn yn fwy amlwg gyda'r dresin halen AG ocsigenedig a'r dresin AG1++ EDTA/BC o'i gymharu â'r dresin AG1+. Mae'r data hyn yn dangos bod gan y gorchuddion arian a brofwyd raddau amrywiol o effaith ar strwythur biofilm, ond nid oedd yr un o'r gorchuddion arian yn gallu dileu'r biofilm, gan gefnogi'r angen am ddull cyfannol o drin heintiau biofilm clwyfau; defnyddio armbands arian. Rhagflaenir triniaeth gan ddad -friffio corfforol i gael gwared ar y rhan fwyaf o'r biofilm.
Mae clwyfau cronig yn aml mewn cyflwr o lid difrifol, gyda gormod o gelloedd llidiol yn aros ym meinwe'r clwyf am gyfnod estynedig o amser, gan achosi niwed i feinwe a disbyddu'r ocsigen sydd ei angen ar gyfer metaboledd cellog effeithlon a swyddogaeth yn y clwyf26. Mae bioffilmiau'n gwaethygu'r amgylchedd clwyf gelyniaethus hwn trwy effeithio'n negyddol ar iachâd mewn amryw o ffyrdd, gan gynnwys atal amlhau celloedd ac ymfudo ac actifadu cytocinau proinflammatory27. Wrth i orchuddion arian ddod yn fwy effeithiol, mae'n bwysig deall yr effaith y maent yn ei chael ar amgylchedd ac iachâd y clwyf.
Yn ddiddorol, er bod pob gorchudd arian yn effeithio ar gyfansoddiad bioffilm, dim ond gorchuddion halen arian ocsigenedig a gynyddodd ail-epithelialization y clwyfau heintiedig hyn. Mae'r data hyn yn cefnogi ein canfyddiadau blaenorol17 a chanfyddiadau Kalan et al. (2017) 28, a ddangosodd broffiliau diogelwch a gwenwyndra da halwynau arian ocsigenedig, gan fod crynodiadau is o arian yn effeithiol yn erbyn bioffilmiau.
Mae ein hastudiaeth gyfredol yn tynnu sylw at y gwahaniaethau mewn technoleg arian rhwng gorchuddion arian gwrthficrobaidd ac effaith y dechnoleg hon ar amgylchedd y clwyf ac iachâd annibynnol ar heintiau. Fodd bynnag, mae'r canlyniadau hyn yn wahanol i astudiaethau blaenorol sy'n dangos bod gwisgo AG1 + + EDTA/BC yn gwella paramedrau iachâd clustiau cwningen anafedig yn vivo. Fodd bynnag, gall hyn fod oherwydd gwahaniaethau mewn modelau anifeiliaid, amseroedd mesur a dulliau cais bacteriol29. Yn yr achos hwn, cymerwyd mesuriadau clwyfau 12 diwrnod ar ôl anaf i ganiatáu i gynhwysion actif y dresin weithredu ar y biofilm dros gyfnod hirach o amser. Cefnogir hyn gan astudiaeth a ddangosodd fod wlserau coesau sydd wedi'u heintio'n glinigol a gafodd eu trin ag AG1 + + EDTA/BC wedi cynyddu i ddechrau ar ôl wythnos o driniaeth, ac yna dros y 3 wythnos nesaf o driniaeth gydag AG1 + + EDTA/CC ac o fewn 4 wythnos o Defnyddio nad ydynt yn antimicrobials. cyffuriau. Gorchuddion CMC i leihau maint wlser30.
Yn flaenorol, dangoswyd bod rhai ffurfiau a chrynodiadau o arian yn cytotocsig in vitro 11, ond nid yw'r canlyniadau in vitro hyn bob amser yn trosi'n effeithiau andwyol yn vivo. Yn ogystal, mae datblygiadau mewn technoleg arian a gwell dealltwriaeth o gyfansoddion arian a chrynodiadau mewn gorchuddion wedi arwain at ddatblygu llawer o orchuddion arian diogel ac effeithiol. Fodd bynnag, wrth i dechnoleg gwisgo arian ddatblygu, mae'n bwysig deall effaith y gorchuddion hyn ar amgylchedd y clwyf31,32,33. Adroddwyd yn flaenorol bod y gyfradd uwch o ail-epithelialization yn cyfateb i gyfran uwch o macroffagau M2 gwrthlidiol o gymharu â'r ffenoteip M1 pro-llidiol. Nodwyd hyn mewn model llygoden blaenorol lle cymharwyd gorchuddion clwyfau hydrogel arian â sylffadiazine arian a hydrogels antimicrobaidd34.
Gall clwyfau cronig arddangos llid gormodol a gwelwyd y gallai presenoldeb niwtroffiliau gormodol fod yn niweidiol i iachâd clwyfau35. Mewn astudiaeth mewn llygod sydd wedi'u disbyddu â niwtroffil, roedd presenoldeb niwtroffiliau yn gohirio ail-beiriannu. Mae presenoldeb niwtroffiliau gormodol yn arwain at lefelau uchel o broteinau a rhywogaethau ocsigen adweithiol, megis uwchocsid a hydrogen perocsid, sy'n gysylltiedig â chlwyfau cronig ac iachâd araf37,38. Yn yr un modd, gall cynnydd yn nifer y macrophage, os heb ei reoli, arwain at oedi wrth wella clwyfau39. Mae'r cynnydd hwn yn arbennig o bwysig os na all macroffagau drosglwyddo o ffenoteip pro-llidiol i ffenoteip pro-iachâd, gan arwain at glwyfau yn methu â gadael cam llidiol iachâd40. Gwnaethom arsylwi gostyngiad mewn niwtroffiliau a macroffagau mewn clwyfau wedi'u heintio â bioffilm ar ôl 3 diwrnod o driniaeth gyda'r holl orchuddion arian, ond roedd y gostyngiad yn fwy amlwg gyda gorchuddion halen ocsigenedig. Gall y gostyngiad hwn fod yn ganlyniad uniongyrchol i'r ymateb imiwnedd i arian, ymateb i lai o bioburden, neu'r clwyf yn ddiweddarach o iachâd ac felly mae celloedd imiwnedd yn y clwyf yn cael eu lleihau. Gall lleihau nifer y celloedd llidiol yn y clwyf gynnal amgylchedd sy'n ffafriol i iachâd clwyfau. Mae mecanwaith gweithredu sut mae ocsalts Ag yn hyrwyddo iachâd haint-annibynnol yn aneglur, ond gall gallu Ag ocsalts i gynhyrchu ocsigen a dinistrio lefelau niweidiol o hydrogen perocsid, cyfryngwr llid, egluro hyn ac mae angen ei astudio ymhellach17.
Mae clwyfau heintiedig cronig nad ydynt yn iacháu yn peri problem i feddygon a chleifion. Er bod llawer o orchuddion yn honni effeithiolrwydd gwrthficrobaidd, anaml y mae ymchwil yn canolbwyntio ar ffactorau allweddol eraill sy'n dylanwadu ar ficro -amgylchedd y clwyf. Mae'r astudiaeth hon yn dangos bod gan wahanol dechnolegau arian wahanol effeithiolrwydd gwrthficrobaidd ac, yn bwysig, effeithiau gwahanol ar amgylchedd ac iachâd y clwyfau, yn annibynnol ar yr haint. Er bod y astudiaethau in vitro ac in vivo hyn yn dangos effeithiolrwydd y gorchuddion hyn wrth drin heintiau clwyfau a hyrwyddo iachâd, mae angen treialon rheoledig ar hap i werthuso effeithiolrwydd y gorchuddion hyn yn y clinig.
Mae'r setiau data a ddefnyddir a/neu a ddadansoddwyd yn ystod yr astudiaeth gyfredol ar gael gan yr awdur cyfatebol ar gais rhesymol.
Amser Post: Gorff-15-2024