Diolch am ymweld â natur.com. Mae gan y fersiwn porwr rydych chi'n ei ddefnyddio gefnogaeth CSS gyfyngedig. I gael y canlyniadau gorau, rydym yn argymell defnyddio porwr mwy newydd (neu analluogi modd cydnawsedd yn Internet Explorer). Yn y cyfamser, er mwyn sicrhau cefnogaeth barhaus, byddwn yn arddangos y wefan heb arddulliau a JavaScript.
Mae sefydlu modelau anifeiliaid o newid modig (MC) yn sylfaen bwysig ar gyfer astudio MC. Rhannwyd pum deg pedwar o gwningod gwyn Seland Newydd yn grŵp gweithrediad ffug, grŵp mewnblannu cyhyrau (grŵp ME) a grŵp mewnblannu pulposus niwclews (grŵp NPE). Yn y grŵp NPE, roedd y disg rhyngfertebrol yn agored trwy ddull llawfeddygol meingefnol anterolateral a defnyddiwyd nodwydd i dyrnu corff asgwrn cefn L5 ger y plât diwedd. Tynnwyd NP o'r disg rhyngfertebrol L1/2 gan chwistrell a'i chwistrellu i mewn iddo. Drilio twll yn yr asgwrn isgondral. Roedd y gweithdrefnau llawfeddygol a'r dulliau drilio yn y grŵp mewnblannu cyhyrau a'r grŵp gweithredu ffug yr un fath â'r rhai yn y grŵp mewnblannu NP. Yn y grŵp ME, gosodwyd darn o gyhyr yn y twll, tra yn y grŵp ffug-weithredu, ni roddwyd unrhyw beth yn y twll. Ar ôl y llawdriniaeth, cynhaliwyd sganio MRI a phrofion biolegol moleciwlaidd. Newidiodd y signal yn y grŵp NPE, ond ni chafwyd newid signal amlwg yn y grŵp gweithrediad ffug a'r grŵp ME. Dangosodd arsylwi histolegol y gwelwyd amlhau meinwe annormal ar y safle mewnblannu, a chynyddwyd mynegiant IL-4, IL-17 ac IFN-γ yn y grŵp NPE. Gall mewnblannu NP i'r asgwrn isgondral ffurfio model anifail o MC.
Mae newidiadau modig (MC) yn friwiau o'r endplates asgwrn cefn a mêr esgyrn cyfagos i'w gweld ar ddelweddu cyseiniant magnetig (MRI). Maent yn eithaf cyffredin mewn unigolion â symptomau cysylltiedig1. Mae llawer o astudiaethau wedi pwysleisio pwysigrwydd MC oherwydd ei gysylltiad â phoen cefn isel (LBP) 2,3. Yn gyntaf, disgrifiodd De Roos et al.4 a Modic et al.5 dri math gwahanol o annormaleddau signal isgochrog ym mêr esgyrn asgwrn cefn. Mae newidiadau math I modig I yn hypointense ar ddilyniannau wedi'u pwysoli gan T1 (T1W) ac yn hyperintense ar ddilyniannau wedi'u pwysoli gan T2 (T2W). Mae'r briw hwn yn datgelu endplates hollt a meinwe gronynniad fasgwlaidd cyfagos ym mêr yr esgyrn. Mae newidiadau modig math II yn dangos signal uchel ar ddilyniannau T1W a T2W. Yn y math hwn o friw, gellir dod o hyd i ddinistrio endplate, yn ogystal â disodli'r mêr esgyrn cyfagos yn frasterog. Mae newidiadau modig math III yn dangos signal isel mewn dilyniannau T1W a T2W. Mae briwiau sglerotig sy'n cyfateb i'r endplates wedi'u harsylwi6. Mae MC yn cael ei ystyried yn glefyd patholegol yr asgwrn cefn ac mae ganddo gysylltiad agos â llawer o afiechydon dirywiol yr asgwrn cefn7,8,9.
O ystyried y data sydd ar gael, mae sawl astudiaeth wedi rhoi mewnwelediadau manwl i etioleg a mecanweithiau patholegol MC. Albert et al. awgrymodd y gallai MC gael ei achosi gan herniation disg disg. Hu et al. Priodoli MC i ddirywiad disg difrifol10. Cynigiodd KROC y cysyniad o “rupture disg mewnol,” sy’n nodi y gallai trawma disg ailadroddus arwain at ficrotears yn yr endplat. Ar ôl ffurfio hollt, gall dinistrio endplate gan y niwclews pulposus (NP) sbarduno ymateb hunanimiwn, sy'n arwain ymhellach at ddatblygu MC11. Ma et al. rhannu barn debyg ac adroddodd fod autoimmunity a achosir gan NP yn chwarae rhan allweddol yn pathogenesis MC12.
Mae celloedd system imiwnedd, yn enwedig lymffocytau cynorthwyydd CD4+ T, yn chwarae rhan hanfodol yn pathogenesis autoimmunity13. Mae'r is-set Th17 a ddarganfuwyd yn ddiweddar yn cynhyrchu'r cytocin proinflammatory IL-17, yn hyrwyddo mynegiant chemokine, ac yn ysgogi celloedd T mewn organau sydd wedi'u difrodi i gynhyrchu IFN-γ14. Mae celloedd Th2 hefyd yn chwarae rhan unigryw yn pathogenesis ymatebion imiwnedd. Gall mynegiant IL-4 fel cell Th2 gynrychioliadol arwain at ganlyniadau imiwnopatholegol difrifol15.
Er bod llawer o astudiaethau clinigol wedi'u cynnal ar MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, mae yna ddiffyg modelau arbrofol anifeiliaid addas o hyd a all ddynwared y broses MC sy'n aml yn digwydd mewn bodau dynol ac a all fod yn a ddefnyddir i ymchwilio i'r etioleg neu driniaethau newydd fel therapi wedi'i dargedu. Hyd yn hyn, dim ond ychydig o fodelau anifeiliaid o MC yr adroddwyd eu bod yn astudio'r mecanweithiau patholegol sylfaenol.
Yn seiliedig ar y theori hunanimiwn a gynigiwyd gan Albert a Ma, sefydlodd yr astudiaeth hon fodel MC cwningen syml ac atgynyrchiol trwy awto -drawsblannu NP ger y plât diwedd asgwrn cefn wedi'i ddrilio. Amcanion eraill yw arsylwi nodweddion histolegol y modelau anifeiliaid a gwerthuso mecanweithiau penodol NP yn natblygiad MC. I'r perwyl hwn, rydym yn defnyddio technegau fel bioleg foleciwlaidd, MRI, ac astudiaethau histolegol i astudio dilyniant MC.
Bu farw dau gwningen o waedu yn ystod llawdriniaeth, a bu farw pedwar cwningen yn ystod anesthesia yn ystod MRI. Goroesodd y 48 cwningen arall ac ni ddangosodd unrhyw arwyddion ymddygiadol na niwrolegol ar ôl llawdriniaeth.
Mae MRI yn dangos bod dwyster signal y meinwe wedi'i fewnosod mewn gwahanol dyllau yn wahanol. Newidiodd dwyster signal corff asgwrn cefn L5 yn y grŵp NPE yn raddol ar 12, 16 ac 20 wythnos ar ôl ei fewnosod (dangosodd dilyniant T1W signal isel, a dangosodd dilyniant T2W signal cymysg ynghyd â signal isel) (Ffig. 1 C), tra bod yr MRI yn ymddangos O'r ddau grŵp arall o rannau wedi'u hymgorffori, arhosodd yn gymharol sefydlog yn ystod yr un cyfnod (Ffig. 1 A, B).
(A) MRI dilyniannol cynrychioliadol y asgwrn cefn meingefn cwningen ar 3 phwynt amser. Ni ddarganfuwyd unrhyw annormaleddau signal yn y delweddau o'r grŵp gweithrediad ffug. (B) Mae nodweddion signal y corff asgwrn cefn yn y grŵp ME yn debyg i'r rhai yn y grŵp gweithrediad ffug, ac ni welir unrhyw newid signal sylweddol ar y safle gwreiddio dros amser. (C) Yn y grŵp NPE, mae'r signal isel i'w weld yn glir yn y dilyniant T1W, ac mae'r signal cymysg a'r signal isel i'w gweld yn glir yn y dilyniant T2W. O'r cyfnod o 12 wythnos i'r cyfnod 20 wythnos, mae'r signalau uchel ysbeidiol o amgylch y signalau isel yn y dilyniant T2W yn gostwng.
Gellir gweld hyperplasia esgyrn amlwg ar safle mewnblannu corff yr asgwrn cefn yn y grŵp NPE, ac mae'r hyperplasia esgyrn yn digwydd yn gyflymach o 12 i 20 wythnos (Ffig. 2 C) o'i gymharu â'r grŵp NPE, ni welir unrhyw newid sylweddol yn yr asgwrn cefn wedi'i fodelu cyrff; Grŵp Sham a ME Group (Ffig. 2 C) 2A, B).
(A) Mae wyneb y corff asgwrn cefn yn y gyfran a fewnblannwyd yn llyfn iawn, mae'r twll yn gwella'n dda, ac nid oes hyperplasia yn yr asgwrn cefn. (B) Mae siâp y safle a fewnblannwyd yn y grŵp ME yn debyg i'r siâp yn y grŵp gweithrediad ffug, ac nid oes unrhyw newid amlwg yn ymddangosiad y safle a fewnblannwyd dros amser. (C) Digwyddodd hyperplasia esgyrn ar y safle a fewnblannwyd yn y grŵp NPE. Cynyddodd yr hyperplasia esgyrn yn gyflym a hyd yn oed yn ymestyn trwy'r ddisg rhyngfertebrol i'r corff asgwrn cefn cyfochrog.
Mae dadansoddiad histolegol yn darparu gwybodaeth fanylach am ffurfio esgyrn. Mae Ffigur 3 yn dangos y ffotograffau o'r adrannau postoperative wedi'u staenio â H&E. Yn y grŵp gweithrediad ffug, roedd y chondrocytes wedi'u trefnu'n dda ac ni chanfuwyd unrhyw amlhau celloedd (Ffig. 3 A). Roedd y sefyllfa yn y grŵp ME yn debyg i'r sefyllfa yn y grŵp ffug-weithredu (Ffig. 3 B). Fodd bynnag, yn y grŵp NPE, gwelwyd nifer fawr o chondrocytes ac amlhau celloedd tebyg i NP ar y safle mewnblannu (Ffig. 3 C);
(A) Gellir gweld trabeculae ger y plât diwedd, mae'r chondrocytes wedi'u trefnu'n daclus gyda maint a siâp celloedd unffurf a dim amlhau (40 gwaith). (B) Mae cyflwr y safle mewnblannu yn y grŵp ME yn debyg i gyflwr y grŵp ffug. Gellir gweld trabeculae a chondrocytes, ond nid oes amlhau amlwg ar y safle mewnblannu (40 gwaith). (B) Gellir gweld bod chondrocytes a chelloedd tebyg i NP yn amlhau'n sylweddol, ac mae siâp a maint chondrocytes yn anwastad (40 gwaith).
Gwelwyd mynegiant interleukin 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA, ac mRNA interferon γ (IFN-γ) yn y grwpiau NPE a ME. Pan gymharwyd lefelau mynegiant genynnau targed, cynyddwyd mynegiadau genynnau IL-4, IL-17, ac IFN-γ yn sylweddol yn y grŵp NPE o gymharu â rhai'r grŵp ME a grŵp gweithredu ffug (Ffig. 4) (P <0.05). O'i gymharu â'r grŵp gweithrediad ffug, cynyddodd lefelau mynegiant IL-4, IL-17, ac IFN-γ yn y grŵp ME ychydig yn unig ac ni chyrhaeddodd newid ystadegol (p> 0.05).
Dangosodd mynegiad mRNA IL-4, IL-17 ac IFN-γ yn y grŵp NPE duedd sylweddol uwch na'r rhai yn y grŵp Operation Sham a'r grŵp ME (p <0.05).
Mewn cyferbyniad, ni ddangosodd y lefelau mynegiant yn y grŵp ME unrhyw wahaniaeth arwyddocaol (p> 0.05).
Perfformiwyd dadansoddiad blot y Gorllewin gan ddefnyddio gwrthgyrff sydd ar gael yn fasnachol yn erbyn IL-4 ac IL-17 i gadarnhau'r patrwm mynegiant mRNA wedi'i newid. Fel y dangosir yn Ffigurau 5A, B, o'i gymharu â'r grŵp ME a'r grŵp gweithredu ffug, cynyddwyd lefelau protein IL-4 ac IL-17 yn y grŵp NPE yn sylweddol (p <0.05). O'i gymharu â Grŵp Gweithredu ffug, methodd lefelau protein IL-4 ac IL-17 yn y grŵp ME â chyrraedd newidiadau ystadegol arwyddocaol (P> 0.05).
(A) Roedd lefelau protein IL-4 ac IL-17 yn y grŵp NPE yn sylweddol uwch na'r rhai yn y grŵp ME a grŵp plasebo (p <0.05). (B) Histogram blot y Gorllewin.
Oherwydd y nifer gyfyngedig o samplau dynol a gafwyd yn ystod llawdriniaeth, mae astudiaethau clir a manwl ar bathogenesis MC ychydig yn anodd. Gwnaethom geisio sefydlu model anifail o MC i astudio ei fecanweithiau patholegol posibl. Ar yr un pryd, defnyddiwyd gwerthuso radiolegol, gwerthuso histolegol a gwerthuso biolegol moleciwlaidd i ddilyn cwrs MC a achoswyd gan autograft NP. O ganlyniad, arweiniodd y model mewnblannu NP at newid graddol yn nwyster y signal o bwyntiau amser 12 wythnos i 20 wythnos (signal isel cymysg mewn dilyniannau T1W a signal isel mewn dilyniannau T2W), gan nodi newidiadau meinwe, a'r histolegol a moleciwlaidd Cadarnhaodd gwerthusiadau biolegol ganlyniadau'r astudiaeth radiolegol.
Mae canlyniadau'r arbrawf hwn yn dangos bod newidiadau gweledol a histolegol wedi digwydd ar safle torri corff asgwrn cefn yn y grŵp NPE. Ar yr un pryd, arsylwyd mynegiant genynnau IL-4, IL-17 ac IFN-γ, yn ogystal ag IL-4, IL-17 ac IFN-γ, gan nodi bod torri meinwe pulposws niwclews awtologaidd yn yr asgwrn cefn Gall y corff achosi cyfres o newidiadau signal a morffolegol. Mae'n hawdd darganfod bod nodweddion signal cyrff asgwrn cefn y model anifail (signal isel yn y dilyniant T1W, signal cymysg a signal isel yn y dilyniant T2W) yn debyg iawn i nodweddion celloedd asgwrn cefn dynol, ac mae'r nodweddion MRI hefyd Cadarnhewch arsylwadau histoleg ac anatomeg gros, hynny yw, mae'r newidiadau yng nghelloedd y corff asgwrn cefn yn flaengar. Er y gall yr ymateb llidiol a achosir gan drawma acíwt ymddangos yn fuan ar ôl pwnio, dangosodd canlyniadau MRI fod newidiadau signal cynyddol yn ymddangos 12 wythnos ar ôl pwnio ac wedi parhau hyd at 20 wythnos heb unrhyw arwyddion o adferiad neu wrthdroi newidiadau MRI. Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu bod NP asgwrn cefn awtologaidd yn ddull dibynadwy ar gyfer sefydlu MV blaengar mewn cwningod.
Mae'r model pwnio hwn yn gofyn am sgil, amser ac ymdrech lawfeddygol ddigonol. Mewn arbrofion rhagarweiniol, gall dyraniad neu ysgogiad gormodol y strwythurau ligamentaidd paravertebral arwain at ffurfio osteoffytau asgwrn cefn. Dylid cymryd gofal i beidio â difrodi na chythruddo'r disgiau cyfagos. Gan fod yn rhaid rheoli dyfnder y treiddiad i gael canlyniadau cyson ac atgynyrchiol, gwnaethom blygio â llaw trwy dorri gwain nodwydd 3 mm o hyd. Mae defnyddio'r plwg hwn yn sicrhau dyfnder drilio unffurf yn y corff asgwrn cefn. Mewn arbrofion rhagarweiniol, canfu tri llawfeddyg orthopedig a oedd yn rhan o'r llawdriniaeth nodwyddau 16 medr yn haws gweithio gyda ni na nodwyddau 18 medr neu ddulliau eraill. Er mwyn osgoi gwaedu gormodol wrth ddrilio, bydd dal y nodwydd o hyd am gyfnod yn darparu twll mewnosod mwy addas, gan awgrymu y gellir rheoli rhywfaint o MC fel hyn.
Er bod llawer o astudiaethau wedi targedu MC, ychydig a wyddys am etioleg a phathogenesis MC25,26,27. Yn seiliedig ar ein hastudiaethau blaenorol, gwelsom fod autoimmunity yn chwarae rhan allweddol yn nigwyddiad a datblygiad MC12. Archwiliodd yr astudiaeth hon fynegiant meintiol IL-4, IL-17, ac IFN-γ, sef prif lwybrau gwahaniaethu celloedd CD4+ ar ôl ysgogi antigen. Yn ein hastudiaeth, o'i gymharu â'r grŵp negyddol, roedd gan y grŵp NPE fynegiant uwch o IL-4, IL-17, ac IFN-γ, ac roedd lefelau protein IL-4 ac IL-17 hefyd yn uwch.
Yn glinigol, mae mynegiant mRNA IL-17 yn cael ei gynyddu mewn celloedd NP gan gleifion â herniation disg28. Gwelwyd mwy o lefelau mynegiant IL-4 ac IFN-γ hefyd mewn model herniation disg nad yw'n gywasgol acíwt o'i gymharu â rheolyddion iach29. Mae IL-17 yn chwarae rhan allweddol mewn llid, anaf meinwe mewn afiechydon hunanimiwn30 ac yn gwella'r ymateb imiwnedd i IFN-γ31. Adroddwyd am anaf meinwe wedi'i gyfryngu gan IL-17 yn MRL/LPR MICE32 a llygod sy'n dueddol o gael eu heffeithlonrwydd33. Gall IL-4 atal mynegiant cytocinau proinflammatory (fel IL-1β a TNFα) ac actifadu macrophage34. Adroddwyd bod mynegiad mRNA IL-4 yn wahanol yn y grŵp NPE o'i gymharu ag IL-17 ac IFN-γ ar yr un pwynt amser; Roedd mynegiant mRNA IFN-γ yn y grŵp NPE yn sylweddol uwch na'r hyn a oedd yn y grwpiau eraill. Felly, gall cynhyrchiad IFN-γ fod yn gyfryngwr yr ymateb llidiol a achosir gan gydberthynas NP. Mae astudiaethau wedi dangos bod IFN-γ yn cael ei gynhyrchu gan sawl math o gell, gan gynnwys celloedd T cynorthwyydd math 1 wedi'i actifadu, celloedd lladd naturiol, a macroffagau35,36, ac mae'n cytocin pro-llidiol allweddol sy'n hyrwyddo ymatebion imiwnedd37.
Mae'r astudiaeth hon yn awgrymu y gallai ymateb hunanimiwn fod yn rhan o ddigwydd a datblygiad MC. Luoma et al. canfu fod nodweddion signal MC a NP amlwg yn debyg ar MRI, ac mae'r ddau yn dangos signal uchel yn Nilyniant T2W38. Cadarnhawyd bod cysylltiad agos rhwng rhai cytocinau â digwyddiadau MC, fel IL-139. Ma et al. awgrymodd y gallai ymwthiad i fyny neu i lawr NP gael dylanwad mawr ar ddigwydd a datblygiad MC12. Adroddodd Bobechko40 a Herzbein et al.41 fod NP yn feinwe imiwnotolant na all fynd i mewn i'r cylchrediad fasgwlaidd o'i enedigaeth. Mae allwthiadau NP yn cyflwyno cyrff tramor i'r cyflenwad gwaed, a thrwy hynny gyfryngu adweithiau hunanimiwn lleol42. Gall adweithiau hunanimiwn gymell nifer fawr o ffactorau imiwnedd, a phan fydd y ffactorau hyn yn agored i feinweoedd yn barhaus, gallant achosi newidiadau mewn signalau43. Yn yr astudiaeth hon, mae gor-iselder IL-4, IL-17 ac IFN-γ yn ffactorau imiwnedd nodweddiadol, gan brofi'r berthynas agos ymhellach rhwng NP a MCS44. Mae'r model anifail hwn yn dynwared datblygiad NP a mynediad i'r plât diwedd yn dda. Datgelodd y broses hon effaith autoimmunity ar MC ymhellach.
Yn ôl y disgwyl, mae'r model anifail hwn yn darparu platfform posib i ni astudio MC. Fodd bynnag, mae gan y model hwn rai cyfyngiadau o hyd: Yn gyntaf, yn ystod y cyfnod arsylwi anifeiliaid, mae angen ewomeiddio rhai cwningod cam canolradd ar gyfer profi bioleg histolegol a moleciwlaidd, felly mae rhai anifeiliaid yn “cwympo allan o ddefnydd” dros amser. Yn ail, er bod tri phwynt amser wedi'u gosod yn yr astudiaeth hon, yn anffodus, dim ond un math o MC (math modig yr wyf yn ei newid y gwnaethom ei fodelu), felly nid yw'n ddigon i gynrychioli'r broses datblygu clefydau dynol, ac mae angen gosod mwy o bwyntiau amser yn well arsylwi ar yr holl newidiadau signal. Yn drydydd, gellir dangos y newidiadau yn strwythur meinwe yn wir trwy staenio histolegol, ond gall rhai technegau arbenigol ddatgelu'r newidiadau microstrwythurol yn y model hwn yn well. Er enghraifft, defnyddiwyd microsgopeg ysgafn polariaidd i ddadansoddi ffurfiad ffibrocartilag mewn disgiau rhyngfertebrol cwningen45. Mae angen astudiaeth bellach ar effeithiau tymor hir NP ar MC ac Endplate.
Rhannwyd pum deg pedwar o gwningod gwyn Seland Newydd (pwysau tua 2.5-3 kg, 3-3.5 mis oed) ar hap yn grŵp gweithrediad ffug, grŵp mewnblannu cyhyrau (grŵp ME) a grŵp mewnblannu gwreiddiau nerf (grŵp NPE). Cymeradwywyd yr holl weithdrefnau arbrofol gan Bwyllgor Moeseg Ysbyty Tianjin, a chynhaliwyd y dulliau arbrofol yn unol â'r canllawiau cymeradwy.
Gwnaed rhai gwelliannau i dechneg lawfeddygol S. Sobajima 46. Gosodwyd pob cwningen mewn safle beichus ochrol a datgelwyd wyneb anterior pum disg rhyngfertebrol meingefnol yn olynol (IVDs) gan ddefnyddio dull retroperitoneal posterolateral. Rhoddwyd anesthesia cyffredinol i bob cwningen (20% urethane, 5 ml/kg trwy wythïen y glust). Gwnaed toriad croen hydredol o ymyl isaf yr asennau i ymyl y pelfis, fentrol 2 cm i gyhyrau'r paravertebral. Datgelwyd yr asgwrn cefn anterolateral cywir o L1 i L6 trwy ddyraniad miniog a swrth o'r meinwe isgroenol sy'n gorgyffwrdd, meinwe retroperitoneol, a chyhyrau (Ffig. 6a). Penderfynwyd ar lefel y disg gan ddefnyddio'r Pelfis Brim fel tirnod anatomegol ar gyfer lefel disg L5-L6. Defnyddiwch nodwydd puncture 16 medr i ddrilio twll ger plât diwedd y fertebra L5 i ddyfnder o 3 mm (Ffig. 6b). Defnyddiwch chwistrell 5-ml i allsugno'r niwclews pulposus awtologaidd yn y disg rhyngfertebrol L1-L2 (Ffig. 6 C). Tynnwch y niwclews pulposus neu'r cyhyrau yn unol â gofynion pob grŵp. Ar ôl i'r twll dril gael ei ddyfnhau, rhoddir cymalau amsugnadwy ar y ffasgia dwfn, ffasgia arwynebol a chroen, gan gymryd gofal i beidio â niweidio meinwe periosteal y corff asgwrn cefn yn ystod llawdriniaeth.
(A) Mae'r disg L5 -L6 yn agored trwy ddull retroperitoneol posterolateral. (B) Defnyddiwch nodwydd 16 medr i ddrilio twll ger endplate L5. (C) Cynaeafir MFs awtologaidd.
Gweinyddwyd anesthesia cyffredinol gydag 20% urethane (5 ml/kg) wedi'i weinyddu trwy'r wythïen glust, ac ailadroddwyd radiograffau asgwrn cefn meingefnol yn 12, 16, ac 20 wythnos ar ôl y llawdriniaeth.
Aberthwyd cwningod trwy chwistrelliad mewngyhyrol o cetamin (25.0 mg/kg) a sodiwm pentobarbital mewnwythiennol (1.2 g/kg) yn 12, 16 ac 20 wythnos ar ôl llawdriniaeth. Tynnwyd yr asgwrn cefn cyfan ar gyfer dadansoddiad histolegol a pherfformiwyd dadansoddiad go iawn. Defnyddiwyd trawsgrifiad gwrthdroi meintiol (RT-QPCR) a blotio gorllewinol i ganfod newidiadau mewn ffactorau imiwnedd.
Perfformiwyd archwiliadau MRI mewn cwningod gan ddefnyddio magnet clinigol 3.0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) gyda derbynnydd coil coes orthogonal. Cafodd cwningod eu anaestheiddio ag 20% urethane (5 mL/kg) trwy wythïen y glust ac yna eu gosod yn supine yn y magnet gyda'r rhanbarth meingefnol wedi'i ganoli ar coil wyneb crwn diamedr 5 modfedd (GE Medical Systems). Cafwyd delweddau lleolwr â phwysau Coronal T2 (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) i ddiffinio lleoliad y ddisg meingefnol o L3-L4 i L5-L6. Cafwyd tafelli wedi'u pwysoli gan awyren sagittal gyda'r gosodiadau canlynol: dilyniant troelli cyflym gydag amser ailadrodd (TR) o 2200 ms ac amser adleisio (TE) o 70 ms, matrics; maes gweledol o 260 ac wyth ysgogiad; Y trwch torri oedd 2 mm, roedd y bwlch yn 0.2 mm.
Ar ôl i'r ffotograff diwethaf gael ei dynnu a lladdwyd y gwningen olaf, tynnwyd y disgiau ffug, wedi'u hymsefydlu cyhyrau, a NP i'w harchwilio yn histolegol. Roedd meinweoedd yn sefydlog mewn fformalin clustogi niwtral 10% am 1 wythnos, wedi'u dadelfennu ag asid ethylenediaminetetraacetig, ac yn rhaniad paraffin. Cafodd blociau meinwe eu hymgorffori mewn paraffin a'u torri'n adrannau sagittal (5 μm o drwch) gan ddefnyddio microtome. Cafodd adrannau eu staenio â hematoxylin ac eosin (H&E).
Ar ôl casglu'r disgiau rhyngfertebrol o'r cwningod ym mhob grŵp, tynnwyd cyfanswm yr RNA gan ddefnyddio colofn UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., China) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr a system drawsgrifio gwrthdroi IMProm II (Promega Inc. , Madison, Wi, UDA). Perfformiwyd trawsgrifio gwrthdroi.
Perfformiwyd RT-QPCR gan ddefnyddio Prism 7300 (Cymhwysol Biosystems Inc., UDA) a SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, UDA) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Roedd cyfaint yr adwaith PCR yn 20 μl ac roedd yn cynnwys 1.5 μl o cDNA gwanedig a 0.2 μM o bob primer. Dyluniwyd primers gan ddylunydd oligoperfect (Invitrogen, Valencia, CA) a'u cynhyrchu gan Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (China) (Tabl 1). Defnyddiwyd yr amodau beicio thermol canlynol: Cam actifadu polymeras cychwynnol ar 94 ° C am 2 funud, yna 40 cylch o 15 s yr un ar 94 ° C ar gyfer dadnatureiddio templed, gan anelio am 1 munud ar 60 ° C, estyniad, a fflwroleuedd. Perfformiwyd mesuriadau am 1 munud ar 72 ° C. Ymhelaethwyd ar yr holl samplau dair gwaith a defnyddiwyd y gwerth cyfartalog ar gyfer dadansoddiad RT-qPCR. Dadansoddwyd data ymhelaethu gan ddefnyddio flexStation 3 (dyfeisiau moleciwlaidd, Sunnyvale, CA, UDA). Cafodd mynegiant genynnau IL-4, IL-17, a IFN-γ eu normaleiddio i'r rheolaeth mewndarddol (ACTB). Cyfrifwyd lefelau mynegiant cymharol mRNA targed gan ddefnyddio'r dull 2-ΔΔCT.
Tynnwyd cyfanswm y protein o feinweoedd gan ddefnyddio homogenizer meinwe mewn byffer lysis ripa (yn cynnwys coctel atalydd proteas a ffosffatase) ac yna ei centrifugio ar 13,000 rpm am 20 munud ar 4 ° C i gael gwared ar falurion meinwe. Llwythwyd hanner cant o ficrogramau o brotein fesul lôn, eu gwahanu gan 10% SDS-PAGE, ac yna eu trosglwyddo i bilen PVDF. Perfformiwyd blocio mewn llaeth sych di-fraster 5% mewn halwynog wedi'i glustogi gan Tris (TBS) sy'n cynnwys 0.1% Tween 20 am 1 h ar dymheredd yr ystafell. Deorwyd y bilen â gwrthgorff cynradd gwrth-decorin cwningen (gwanedig 1: 200; Boster, Wuhan, China) (gwanedig 1: 200; Bioss, Beijing, China) dros nos ar 4 ° C ac ymatebodd ar yr ail ddiwrnodau; gyda gwrthgorff eilaidd (imiwnoglobwlin G gwrth-gwningen gafr ar 1: 40,000 gwanhau) wedi'i gyfuno â peroxidase marchruddygl (Boster, Wuhan, China) am 1 awr ar dymheredd yr ystafell. Canfuwyd signalau blot y gorllewin trwy fwy o chemiluminescence ar y bilen chemiluminescent ar ôl arbelydru pelydr-X. Ar gyfer dadansoddiad densitometrig, cafodd blotiau eu sganio a'u meintioli gan ddefnyddio meddalwedd bandscan a mynegwyd y canlyniadau fel cymhareb imiwnoleddedd genynnau targed i imiwnoleddedd twbulin.
Perfformiwyd cyfrifiadau ystadegol gan ddefnyddio pecyn meddalwedd SPSS16.0 (SPSS, UDA). Mynegwyd data a gasglwyd yn ystod yr astudiaeth fel gwyriad cymedrol ± safonol (cymedr ± SD) a'i ddadansoddi gan ddefnyddio dadansoddiad mesurau unffordd dro ar ôl tro o amrywiant (ANOVA) i bennu gwahaniaethau rhwng y ddau grŵp. Ystyriwyd bod p <0.05 yn ystadegol arwyddocaol.
Felly, gall sefydlu model anifail o MC trwy fewnblannu NPs awtologaidd i gorff yr asgwrn cefn a pherfformio arsylwi macroanatomegol, dadansoddiad MRI, gwerthuso histolegol a dadansoddiad biolegol moleciwlaidd ddod yn offeryn pwysig ar gyfer asesu a deall mecanweithiau MC dynol a datblygu therapiwtig newydd dynol a datblygu newydd a datblygu ymyriadau.
Sut i ddyfynnu'r erthygl hon: Han, C. et al. Sefydlwyd model anifail o newidiadau modig trwy fewnblannu niwclews pulposus awtologaidd i asgwrn isgochrog yr asgwrn cefn meingefnol. Sci. Cynrychiolydd 6, 35102: 10.1038/SREP35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., a Boos, Delweddu Cyseiniant Magnetig yr asgwrn cefn meingefnol: mynychder herniation a chadw disg, cywasgiad gwreiddiau nerfau, annormaleddau plât diwedd, a wyneb -osteoarthritis ar y cyd mewn gwirfoddolwyr anghymesur . cyfradd. Radioleg 209, 661–666, doi: 10.1148/radioleg.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, a Leboeuf-Eed, K. Newidiadau modig a'u perthynas â chanfyddiadau clinigol. Cyfnodolyn asgwrn cefn Ewropeaidd: Cyhoeddiad swyddogol Cymdeithas asgwrn cefn Ewrop, Cymdeithas Anffurfiad asgwrn y Cefn Ewrop, a Chymdeithas Ymchwil asgwrn cefn ceg y groth 15, 1312–1319, doi: 10.1007/S00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Newidiadau modig yn endplates asgwrn cefn meingefnol: mynychder a chysylltiad â phoen yng ngwaelod y cefn a sciatica mewn gweithwyr gwrywaidd canol oed. Asgwrn cefn 32, 1116–1122, doi: 10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
Mae De Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., a Dalinka, M. MRI o fêr esgyrn yn newid ger y plât diwedd mewn clefyd dirywiol yr asgwrn cefn meingefnol. Ajr. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, a Carter, Clefyd Discerative Jr: Gwerthuso newidiadau mêr asgwrn cefn gydag MRI. Radioleg 166, 193–199, doi: 10.1148/radioleg.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, a Carter, Delweddu JR o Glefyd Disg dirywiol. Radioleg 168, 177–186, doi: 10.1148/radioleg.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Rhagfynegwyr newidiadau signal endplat neovertebral (MODIC) yn y boblogaeth yn gyffredinol. Cyfnodolyn asgwrn cefn Ewropeaidd: Cyhoeddiad swyddogol Cymdeithas asgwrn cefn Ewrop, Cymdeithas Anffurfiad asgwrn y Cefn Ewrop, a Chymdeithas Ymchwil asgwrn cefn ceg y groth, Adran 19, 129–135, doi: 10.1007/S00586-009-1184-5 (2010).
Mae Albert, HB a Mannisch, K. Modic yn newid ar ôl herniation disg meingefnol. Cyfnodolyn asgwrn cefn Ewropeaidd: cyhoeddiad swyddogol Cymdeithas asgwrn cefn Ewrop, Cymdeithas Anffurfiad asgwrn Cefn Ewrop a Chymdeithas Ewropeaidd Ymchwil asgwrn cefn ceg y groth 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Gall Kerttula, L., Luoma, K., Cerbyd, T., Gronblad, M., a Kaapa, E. Math Math I Math I ragweld dirywiad disg dadffurfiol blaengar yn gyflym: astudiaeth ddarpar flwyddyn. Ewropeaidd Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ a Fan, SW Modic Newidiadau: Achosion posibl a chyfraniad at ddirywiad disg meingefnol. Rhagdybiaethau meddygol 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, rhwygo disg mewnol HV. Problemau llithriad disg dros 50 mlynedd. Asgwrn cefn (Phila PA 1976) 11, 650-653 (1986).
Amser Post: Rhag-13-2024